Juan Palacios-Ortega, Esperanza Rivera-de-Torre, José G. Gavilanes, J. Peter Slotte⁎, Álvaro Martínez-del-Pozo⁎

Evaluation of different approaches used to study membrane permeabilization by actinoporins on model lipid vesicles

BBA-Biomembranes 1862: 183311

DOI: 10.1016/j.bbamem.2020.183311

RESUMEN

La liberación del contenido acuoso de vesículas lipídicas modelo es un procedimiento estándar para evaluar la eficiencia de la formación de poros por parte de las actinoporinas, unas proteínas tóxicas del veneno de anémonas marinas. La esticolisina II (StnII), producida por Stichodactyla helianthus, es una de las que se han estudiado con mayor detalle y constituye también el objeto de este artículo. Todo se inició con la observación, repetida y consistente, de que, independientemente de la sonda elegida, la acción de StnII nunca es suficiente para vaciar completamente las vesículas. Un resultado difícil de explicar si StnII forma poros completamente estables y permeables a las sondas empleadas, como se asumía. Para abordar esta cuestión, se utilizó toda una variedad de sondas, incluyendo rodamina 6G o Tb3+, para ensayar la permeabilidad de estos poros. Los resultados indicaron que las sondas habituales son demasiado grandes para atravesarlos, y que entonces el mencionado método estándar de lo que en realidad informa es de la permeabilidad transitoria de la membrana, inducida por StnII, y no del paso de solutos a través de poros estables, perfectamente ensamblados. Para evaluar la permeabilidad de estas estructuras, se utilizó también un ensayo basado en el empleo de ditionito, que demostró que los poros finales sí están abiertos, pero sólo son accesibles a solutos de pequeño tamaño, independientemente de su carga eléctrica neta.